Wie kann ich Isolieren Bakterien aus Boden

? Boden ist eine reiche Quelle für viele verschiedene Arten von Bakterien. Bakterien helfen bei der Zersetzung von Pflanzen und Tieren organischen Stoffen, bei der Festsetzung der anorganischen Elementen und in der Interaktion mit Pflanzenwurzeln und Bodenpartikeln . Sogar in einem kleinen Bodenprobe , wie sie in einem Esslöffel enthalten , gibt es Millionen von einzelnen Bakterien vorhanden . Die Aufgabe bei der Isolierung einzelner Bakterien ist es, die Bodenprobe zu verdünnen, um die Bakterienkonzentration niedrig genug , dass ein einziges Bakterium kann von anderen getrennt werden, erhalten und kann auf Nähragar in eine reine Kolonie wachsen. Was Sie
Trypticasesojabrühe Brauchen
5 ml Reagenzgläser, sterilisiert und verschlossen
Sterile Holz Popsicle Sticks
Wax Markierstift
Reagenzglasgestell
Papierhandtücher
Bleach (10 -Prozent-Lösung )
Bunsenbrenner
Impföse Spiele
Trypticase -Soja-Agar
Petrischalen
Incubator
Kühlschrank
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Bodenprobe
1 Reagenzgläser zum Verdünnen von Bodenproben eingesetzt.

Set beiseite ein verkorkt sterilen Reagenzglas containg 5 ml Nährstoff Trypticasesojabrühe . Wählen Sie eine sterile Popsicle Stick.
2 Verwenden Sie eine sterile Popsicle Stick an Boden zu sammeln.

Gehen Sie nach draußen und sammeln eine kleine Bodenprobe mit der Spitze des Eis am Stiel -Stick, mit sterilen Technik , eine Methode, um sicherzustellen, dass die Probe nicht verunreinigt ist und der Benutzer nicht infiziert ist.
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Kappe des Reagenzglas und fügen Sie den Boden, um die Nährlösung im Reagenzglas . Mischen Sie den Boden in der Brühe mit dem Popsicle Stick. Decken Sie das Reagenzglas mit der Kappe. Schreiben Sie den Abholtermin und Abholort auf der Seite des Testrohrmit der Wachs -Kennzeichnung Bleistift.
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Legen Sie die Teströhre in einem Reagenzglas Rack für etwa 30 Minuten, damit der Boden sich absetzen der Boden .
Impfen Petrischale
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Desinfizieren Sie die Arbeitsfläche durch Reinigung mit 10 Prozent Bleichlösung und Papierhandtücher .
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Schalten Sie die Petrischale , so der Bodendeckel , die das Agar ist oben. Zeichnen Sie ein T auf dem Bodendeckel , mit dem Querbalken des T Abtrennung des oberen Drittels der Deckel und der Schaft des T Teilung der unteren zwei Drittel in die Hälfte.
7 Verwenden Sie ein Bunsenbrenner flamm Impfösen .

Schalten und Licht der Bunsenbrenner . Flamme die Impfung Schleife über der Bunsenbrenner-Flamme .
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uncap das Reagenzglas und berühren Sie die Schleife, um die obere Schicht der klarer Flüssigkeit. Ziehen Sie die Schleife und neu decken das Reagenzglas.
Der T- Streak -Methode
9 Machen Sie eine Zick-Zack- Streifen mehr als ein Drittel der Schale.

Verwenden Sie den Querbalken des T Sie auf der Rückseite des Bodendeckels als Bezugspunkt zog . Berühren Sie die Impföse auf einer Seite den Raum über der Querlatte T und ziehen Sie die Spitze über der Oberfläche des Agar in einer Zickzacklinie , endet die Linie an der gegenüberliegenden Seite des Raumes.
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entfernen Sie die Impföse und schließen Sie die Petrischale. Flamme die Schleife in der Bunsen -Brenner, und lassen Sie es kurz abkühlen. Öffnen Sie die Petrischale und berühren Sie die Schleife, um eine Stelle in der Nähe der ganz am Ende der bereits von der Schleife gezeichneten Linie . Machen Sie eine weitere Zickzacklinie im rechten Winkel zu der ersten Zeile , die die erste Raum unter der Querlatte T und an einer Seite des Stammes .
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die Schleife entfernen und schließen Sie die Petrischale. Flamme die Schleife wieder , öffnen Sie die Petrischale , und berühren Sie die leicht abgekühlte Schleife in die zweite Zeile in der Nähe von dessen Ende. Zeichnen Sie ein weiteres Zickzacklinie im rechten Winkel zu der zweiten Zeile in der verbleibenden Freifläche auf der Petrischale.
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die Petrischale nach dem Rückzug der Schleife zu schließen. Flamme die Schleife und legen Sie sie beiseite . Schalten Sie den Bunsenbrenner .
Sekundär Kultur
13 Wählen Sie eine einzelne Kolonie , um Bakterien weiter zu isolieren .

Setzen Sie die Petrischale in einem Brutschrank bei 30 Grad Celsius für 48 Stunden. Nehmen Sie es aus und untersuchen die Agar für das Wachstum der Bakterienkolonien . Wählen Sie eine Kolonie, die einheitliche und diskrete sieht in Gesamterscheinung , ein Hinweis , dass die Kolonie entstand aus einem einzigen Bakterium . Kreis der Standort der Kolonie auf der Rückseite des Bodendeckels mit dem Markierungsstift .
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Flamme der Impföse . Öffnen Sie die Petrischale , und berühren Sie die leicht abgekühlte Schleife zum Zentrum der Kolonie.
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die Schritte zur Herstellung eines T- Streifen auf eine neue Petrischale mit Agar in dem Bodendeckel wiederholen . Wenn der Streifen gemacht und die Petrischale geschlossen ist, schreiben Sie das Datum und die Bodenprobe der Impfstoff wurde aus auf der unteren Seite des unteren Deckels übernommen. Schalten Sie den Bunsenbrenner .
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die Petri-Platte für 48 h Inkubation bei 30 Grad Celsius. Untersuchen Sie die Kolonien, die auf dem Agar gewachsen sind , auf der Suche nach Einheitlichkeit der Farbe, Form und Textur. Wiederholen Sie den sekundären Kulturverfahren , wenn es irgendwelche Kolonien , die sich deutlich im Aussehen von den anderen abweichen , die anzeigt, dass ein einzelnes Bakterium wurde nicht isoliert.
17 Identisch aussehende Kolonien zeigen bakterielle Isolation.

Kühlen der Agar-Platte , die identisch erscheinenden Kolonien enthält auf ihm, mit der Gleichförmigkeit , ein guter Hinweis darauf, dass nur ein einziges Bakterium aus der Bodenprobe isoliert worden.
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anderen Tests für Perform Identifizierung der isolierten Bakteriums wenn gewünscht, wie gram Flecken, die mikroskopische Untersuchung und Kultur auf verschiedenen Arten von Agar .